高敏技术，让核酸检测更精准！
一、肝炎治愈，检测先行！
慢性乙型和丙型肝炎是我国主要的卫生挑战，二者是引起肝癌的根源。据估算，我国乙肝病毒携带者约万人，丙肝感染者万人，每年约33万人死于乙肝或丙肝感染导致的肝硬化和原发性肝癌，其中有60%以上的病例是因没有及时检测和治疗所致。
根据世界卫生组织《-年全球卫生部门病毒性肝炎战略》要求，在年前实现全球消除病毒性肝炎危害，最需要解决的是检测和治疗覆盖率低的问题。所以，世卫组织将年世界肝炎日的活动主题定为“检测治疗肝炎”，我国肝炎日宣传主题“积极预防、主动检测、规范治疗、全面遏制肝炎危害”。及时有效的检测，加上科学的抗病毒治疗方案，乙肝可“临床治愈”，丙肝治愈率达99%。
核酸检测对于急慢性肝炎感染者的临床管理，甚至对血液安全筛查意义重大，已成为重要的检测指标并广泛应用（详见前几期内容）。然而，目前国内常规HBVDNA及HCVRNA检测仍不能充分满足临床需求。
（1）低载量和高载量病毒样本无法检出
常规国产试剂检测灵敏度低，线性范围窄。检测下限浓度一般在~IU/ml，低于此浓度的样本无法检出，即IU/ml以下的样本判为阴性，实为假阴性。对于抗病毒用药后病毒载量迅速下降的病例，较高的检测限不利于治疗终点（低于试剂盒检测下限）判断，一旦停药疾病仍会复发；隐匿性HBV感染者由于病毒分泌、复制障碍，HBVDNA不可测，但血清ALT和AST仍异常，不同方法学指标相矛盾；此外，较高的检测限拉长了检测“窗口期”，无法发现低载量窗口期病人和隐匿感染者，造成漏检，在术前(产前、输血前)检测意义重大。
最高检测上限值不够高，一般为1.0E+7IU/ml以下，高浓度的样本也无法稳定检出，需要进行稀释等操作，同样不能满足需求。
（2）结果稳定性不足、干扰临床判断
一般国产试剂无抗干扰能力优化。溶血、黄疸及脂血甚至抗病毒药物对检测结果影响大，可能造成假阴性或假阳性，检测结果与免疫生化指标或临床表现不符，干扰临床决策。与试剂样本核酸纯化能力及扩增试剂的质控体系等有关。
同时，对突变样本检出能力差，一方面可能导致漏检，另一方面不利于治疗过程疗效监测和耐药发生监控，影响患者临床管理。
（3）实验人工操作，耗时、费力、效率低
基于成本考虑，常规国产试剂多采用简单核酸纯化方案，甚至无纯化步骤，样本处理量（5~ul不等）和上样量（2~10ul不等）少，能“抓”取的核酸量少、得率低；同时杂质多、纯度差，最终导致灵敏度低，漏检率高的情况。
现阶段各临床机构多采用以人工操作为主的常规试剂，结果准确性和重复性一般，同时耗时、费力，影响工作效率，不能满足日渐增长的样本量需求。
二、高敏技术，检测更精准！
（1）临床应用意义
高灵敏度HBV、HCV核酸检测能更有效检出低病毒载量和突变的病例，缩短检测窗口期，减少漏检；高敏检测结果更稳定，为抗病毒治疗起点和终点判断提供理想依据，为疗效监控、耐药监测及预后判断提供更可靠保障，符合“精准医学”时代要求。
自动化操作大大减少实验人为误差，缩短耗时，利于标准化。同时，减少了人力成本，提升科室工作效率和服务能力。
（2）国内外应用情况
国外高敏技术应用成熟，各指南对高灵敏度HBVDNA和HCVRNA检测定义为最低检出限的要求，HBVDNA：15IU/ml（WHO），12IU/ml(APASL)，10IU/ml（AASLD、EASL）；HCVRNA：50IU/ml（APASL），25IU/ml（AASLD），15IU/ml（EASL）。
中国版《乙肝/丙肝防治指南》建议采用灵敏度和精确度高、线性范围广的PCR方法进行HBVDNA和HCVRNA定量检测，结果采用IU/ml表示。
《核酸扩增检测用试剂（盒）行业标准》对体外诊断用HBV、HCV核酸扩增试剂盒设计要求：1在产品设计中加入全程参与的内标；2在扩增检测前，样本（含质控品、标准品）应进行核酸提取、纯化；3核酸加样体积不小于20μl，总反应体积不小于40μl。
三、达安高敏，让精准更“精准”！
参考资料
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